EMENTA - Os avanços nas tecnologias de DNA surtiram um enorme impacto no campo das análises genéticas moleculares para doenças raras causadas por mutações em um único gene (monogenéticas), destinados a indivíduos sintomáticos (testes diagnósticos) ou assintomáticos (testes preditivos). O presente curso fará uma abordagem teórico-prática sobre as técnicas mais relevantes de biologia molecular para o estudo de um gene em busca de mutações ou de polimorfismos genéticos ligados a doença.

METODOLOGIA - O conteúdo teórico será em formato de aulas expositivas ou discussão de artigo. O conteúdo prático ocorrerá através do uso de ferramentas de bioinformática para a busca de genes ligados a doenças, desenho de primers, mapas de restrição e aplicação de técnicas de biologia molecular na identificação de mutações ou polimorfismos genéticos (PCR Alelo Específico, PCR-RFLP, RT-PCR Quantitativo e RT-PCR com sondas TaqMan).

CONTEÚDO PROGRAMÁTICO

I - TEORIA

- Noções sobre gene e doença genética humana, polimorfismos e mutações gênicas.

- Fundamentos teóricos das principais metodologias utilizadas em genética humana

II - PRÁTICA

- Busca do gene no Ensembl ( http://www.ensembl.org/index.html)

- Noções sobre desenho de primers (oligonucleotídeos) usando o Primer3Plus (http://www.bioinformatics.nl/cgi-bin/primer3plus/primer3plus.cgi/)

- Reações de PCR alelo específico e PCR/ RFLP convencionais; Corrida em géis de agarose e poliacrilamida ; Digestão com enzima de restrição do produto de PCR; RT-PCR quantitativo (ou Sybr Green) para identificação de mutação conhecida ; RT-PCR com sonda Taqman para estudo análise de mutações

- Consulta de base de dados de mutações na internet

- Análise e discussão sobre os resultados e as técnicas utilizadas

AVALIAÇÃO

Desenvolver uma estratégia para a análise de um gene utilizando as técnicas apresentadas no curso, isto é, o aluno deverá escrever um miniprojeto (um estudo molecular) onde descreverá a utilização de duas ou três técnicas para estudar polimorfismos, mutações ou outra característica qualquer de um gene baseado nas informações que recebeu durante o curso.

BIBLIOGRAFIA

Genética Essencial - Pimentel M, Santos-Rebouças C e Gallo C. Organização Carlos Alberto Mourão Júnior e Dimitri Marques Abramov - Guanabara Koogan

Artigos Científicos